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消除細胞聚團就是這么簡單！
發布時間： 2021-09-22 點擊次數： 2706次當在生長培養基中進行單懸浮細胞培養時，樣本中出現細胞丟失的情況并不少見。當細胞破裂時，它們會釋放DNA和碎片，導致細胞聚集成大團塊，使其難以擴張。細胞聚團既可導致細胞凋亡，也可引起細胞死亡。
隨著更多的細胞死亡并釋放碎片，問題將繼續惡化。盡可能快地處理或避免細胞聚團將有利于實驗的后續結果。
為什么細胞聚團是個問題？
單細胞懸浮培養基的目標是為靶細胞提供盡可能多的生長資源。這包括充足的生長營養和充足的繁殖空間。當細胞聚集在一起時，它們會相互限制，降低細胞對營養吞吐量，最終影響生長結果。
細胞聚團也會導致靶細胞的回收率降低，并且會干擾標記，這也是懸浮細胞標記的成功率不高的原因，某些細胞分析方法，如流式細胞術，需要對細胞進行適當的分離。在流式細胞術中，大量細胞以快速的液流通過機器。這臺被稱為細胞儀的機器檢測不同細胞之間物理特性的差異，并使用熒光燈對它們進行相應的標記。如果細胞通過試管時聚集在一起，細胞儀將很難準確測量它們的特性。這會導致它們被不正確地分類，并對實驗結果產生負面影響。
細胞聚團的原因防止細胞聚團的最佳方法之一是了解是什么導致了細胞聚集，并采取預防措施避免這些事件的發生。培養物中細胞可能聚集的一些原因包括：
1.過度消化-某些用于組織分解的酶，如胰蛋白酶，如果過量使用會導致細胞結塊
2.環境壓力-物理壓力和反復的溫度變化會導致細胞死亡，從而導致細胞的“粘性"的DNA分子將相鄰的細胞連接在一起
3.組織分解-在制備單細胞懸浮液時，使用酶、機械或化學分解策略可使細胞破裂，從而導致碎片的聚團。
4.過度生長-當細胞在其培養基中密度過大的時候，細胞將開始溶解并釋放碎片，碎片中的粘性因子會將細胞聚集到一起
5.污染-某些細菌和真菌病原體導致細胞溶解；結塊通常是細胞培養物被污染的跡象
6.雖然其中一些是由于實驗錯誤而發生的，但實際也有部分的細胞具有天生的聚團現象，比如大部分的半懸浮細胞，BV-2 ,NCI-H716等等，半懸浮細胞一般在在整體匯合度70%左右就要進行傳代操作了，這樣可以降低細胞聚成大團塊的風險。
怎么減少細胞聚團？1. 在開始實驗之前，可以采取一些措施來防止細胞聚集。例如，一種名為DNA酶I的內切酶可以混合到培養基中，從破裂的細胞中分離DNA。分解這些多余的碎片有助于保持靶細胞生長的空間。然而，dna酶I使用過多會導致細胞突變，最終會影響您的實驗效果，所以實在不是逼不得已，不建議使用。
2. 通過適當的處理和設備使用，也可以減少結塊。如果使用離心機分離或混合樣品，將其設置為正確的速度可以減少聚團，通常情況下，較快的速度可以離心散細胞，但在高速下也必須考慮細胞的脆弱性，所以適當的延長離心的時間也不失為一種穩靠的離心散懸浮聚團細胞的方法
3.還有一些方法可以分離細胞，這些細胞聚集在一起，不會造成過度的傷害。某些叫做螯合劑的化學物質與正電荷離子有親和力。根據細胞聚團的性質，可以添加螯合劑來溶解它們之間的粘連，而不會傷害細胞。乙二胺四乙酸（EDTA）是一種螯合劑，常用于溶解鈣粘連。
4.另一種細胞清除方法是氚化。氚化過程涉及到溫和、重復的吸管，以打破細胞間的弱粘連。
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