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細胞培養之真菌細菌污染的防治方法
發布時間： 2021-09-24 點擊次數： 5298次請遵守細胞污染永恒定律：無論什么細胞只要是不重要的細胞污染了，立刻加84棄之，重新復蘇新凍存管培養；實在需要挽救的請參考以下：
細菌污染：主要有洋蔥霍爾伯德菌型污染
確定是非常珍貴的細胞 建議分別配置含10倍慶大霉素和兩性霉素溶液（G/A)的PBS和5倍慶大霉素和兩性霉素溶液（G/A)的*培養基各一份。然后先用10倍雙抗的PBS洗滌細胞5-10次， 然后用5倍雙抗的*培養洗滌細胞3次以上,再加上含雙倍的G/A溶液放培養箱培養，一個小時后換液，持續4個小時后，再加上正常培養細胞所需的抗生素，過夜，到最終確定細胞沒有任何污染物，因此時細胞受損過大，建議優化培養基方式（血清提高2%-5%）或者立即凍存細胞，一個月后復蘇。
真菌污染：
污染的多是曲霉菌，白色念珠菌，酵母菌，黑霉菌，孢子菌，真菌主要以預防為主，防治為輔，已經污染了，建議采用以下方法：
1. 細胞一旦污染，很難挽救，即使使用制霉菌素或放線菌素D，也是傷敵八千自損一萬的辦法，可使用抗生素進行查殺，但是高濃度的抗霉菌素對細胞有毒性作用。
2. 把所有細胞從污染的CO2孵箱轉移，采用過氧乙酸擦洗孵箱(全部，尤其四個角)。并把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細胞；
3. 用0.5%新潔爾滅擦拭超凈臺和墻壁，確保不留死角，地面用新潔爾滅消毒液拖地。
4. 將環境*消毒，整個培養間高錳酸鉀或者乳酸熏蒸,孵箱內部包括托盤等全部用苯酚搽洗,封閉2天。
真菌污染預防方法：
1)，將細胞移出來，用微量硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內，再把水盤里加適量硫酸銅或者酸氫二鈉高鹽液體防止霉菌
2)孵箱應定期清潔，大約一個月左右清潔一次，
3)可在培養基里加兩性霉素或制霉菌素)或[放線菌素D或雙抗進行預防。
4)最主要的還是要培養良好的無菌觀念，實驗室盡量不要大聲說話，佩戴好口罩，手套，操作時應小心，避免培養基撒入培養箱以及生物安全柜，這些撒入培養箱的培養基為細菌及真菌的繁殖提供了很好的條件。
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