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細胞為何總是抱團生長？
發布時間： 2021-10-08 點擊次數： 4349次細胞為啥總是一言不合就抱團生長？！
是細胞污染了還是正?，F象？
是消化不好了還是鋪板有問題？
抱團細胞越來越多，怎么樣才能讓細胞分開生長？
請認真閱讀以下干貨，看看能否幫您答疑解惑！
細胞抱團一定代表細胞狀態不好嗎？
細胞生長的時候肯定是要相互聯系，大部分的細胞都是要成片生長的，應該仔細觀察每種細胞的狀態，抱團并不一定代表不好：
1、若細胞輪廓清晰，可看清楚一個個的細胞，像葡萄一樣，一串串的，就是狀態好的，說明細胞在分裂。
2、但大部分細胞抱團絕對不是一件好事！如果輪廓消失，出現細胞融解或細胞變灰暗、透光性變差，就是細胞死亡了。葡萄狀和抱團，在鏡下其實很容易區別。抱團死亡的細胞可以看到細胞碎片，如下圖：
▲RAW264.7細胞-正常狀態
▲RAW264.7細胞-異常狀態
▲H9c2細胞-正常狀態
▲H9c2細胞-異常狀態
3、細胞抱團是因為細胞污染了嗎？一般細胞培養液清亮，就不是污染。如果是污染了的話，可以通過觀察培養液顏色，若污染，則很渾濁。
細胞為啥總是喜歡抱團？
細胞死亡釋放出DNA，纏繞其他細胞，形成黏性的細胞團（消化的過程可能過于粗暴，吹打太用力，消化太久，消化液太強或有毒性等）。
細胞離心速度過大或時間太長。
消化不*的時候，細胞和細胞之間的連接沒有分開；消化過度的時候，圓形的細胞容易聚堆，再分開很困難！
狀態不好、老化的細胞，也可能會出現抱團生長的情況（比如換液不及時、長的太滿才傳代、污染等造成的細胞狀態差）。
傳代時沒有吹打均勻，細胞團多，培養時就會是一團一團的。
傳代后細胞鋪板不均勻。
有可能是雜細胞，或者死細胞。
細胞未消化開。
非震蕩培養或細胞量過多的話就會成團。
如何避免細胞抱團？
用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞。
對于貼壁非常牢固的細胞（如MDCK），為了細胞更好的狀態，更漂亮的樣子，建議分多批多次消化，這樣才能最大限度地降低胰酶對細胞的損傷，保證細胞的狀態能夠*。
細胞生長密度不要太高，70%－80％就好（細胞剛剛基本成單層細胞，沒有出現堆疊生長），這樣細胞抱團的幾率就大大減少了。如果細胞已經長成集落，可先將細胞低密度傳代，第二天再消化傳代，這樣連續傳三次，細胞抱團就會越來越小，這樣幾代過后，再按照常規消化方法和時間能將細胞逐漸傳成單個的。
消化過程中最好不要使勁搖動培養瓶，這樣細胞特別容易成屑樣脫落。細胞一旦脫落入懸液里就很難再將他吹打成單個（因為細胞沒有受力點了，所以細胞很難分散開）。所以必須要在細胞未脫落之前將其吹打開，嚴格控制好消化程度。
消化過程需要使用槍頭輕輕吹打，切忌使勁拍培養瓶的側壁。拍瓶子想要將細胞拍散的力度對于細胞來說相當于大地震，細胞本身是無法承受如此振蕩的。
細胞抱團了，要如何處理？
如果細胞抱團不影響生長就沒問題，只是計數的時候要麻煩點了。
如果感覺有死細胞的DNA，在細胞懸液中加入幾滴無菌的DNAse(1mg/ml溶于水)將DNA鏈打斷。輕柔地吹打細胞，防止對細胞膜造成物理損傷。
如果細胞抱團是肉眼可見的，那就讓細胞靜置半分鐘左右，然后吸取上半部分沒有抱團的細胞懸液來傳代。如果細胞抱團肉眼不可見，那可能沒有特別好的分離方法，只能等細胞狀態改善后將這部分細胞慢慢排除出去。
☆ 如若需要細胞進行抱團，那么該如何處理呢？
以MSC誘導成軟骨方向分化為例：可使用96孔板，每個孔板接種30萬個細胞。
總結 引起細胞抱團的根本原因是細胞狀態變差，且在吹打細胞的時候，那些狀態好的細胞也會因為多次吹打而受損，所以我們認為最根本的解決方法是摸透培養的細胞的生長習性，讓細胞保持較好的生長狀態。
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