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電穿孔法轉(zhuǎn)染如此“萬(wàn)能”，為什么還要用其他方法？
發(fā)布時(shí)間： 2021-10-09 點(diǎn)擊次數(shù)： 2645次同學(xué)們?cè)谶M(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，肯定被各種各樣的轉(zhuǎn)染試劑挑花了眼吧。商業(yè)化的轉(zhuǎn)染試劑通常針對(duì)多重細(xì)胞類型、不同的核酸和各種特定的用途，也就是說(shuō)，你要從種類繁多的試劑中挑選適合你的。
這時(shí)候，電穿孔法轉(zhuǎn)染就進(jìn)入了我們的視野。
電穿孔法轉(zhuǎn)染原理是通過(guò)脈沖電場(chǎng)，使得細(xì)胞膜上產(chǎn)生小孔，通透性被暫時(shí)的提高。周圍的小分子穿過(guò)小孔，擴(kuò)散到細(xì)胞內(nèi)。理論上說(shuō)，電穿孔法轉(zhuǎn)染是可以對(duì)任何細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，可以轉(zhuǎn)染DNA、RNA、蛋白、糖類等，也不需要特殊的試劑。
但為什么還是有很多實(shí)驗(yàn)者選擇了脂質(zhì)體介導(dǎo)法等方案呢？原因如下
1、電穿孔法雖然不需要特殊試劑，但需要購(gòu)買昂貴的電轉(zhuǎn)儀。
2、電穿孔法轉(zhuǎn)染會(huì)殺死細(xì)胞，因此需要較多的細(xì)胞和外源分子。
3、電穿孔法對(duì)實(shí)驗(yàn)者的操作水平要求較高。過(guò)低的電場(chǎng)強(qiáng)度、過(guò)長(zhǎng)的電脈沖時(shí)間，會(huì)裂解細(xì)胞；電壓過(guò)低，過(guò)短的電脈沖時(shí)間則會(huì)降低轉(zhuǎn)染效率。
因此，電穿孔法不是真正的“萬(wàn)能"，實(shí)驗(yàn)上也需要多學(xué)習(xí)、優(yōu)化。
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