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共轉(zhuǎn)化，篩選轉(zhuǎn)染細(xì)胞的實(shí)用工具

發(fā)布時(shí)間： 2021-10-11　　點(diǎn)擊次數(shù)： 2004次

想要達(dá)到轉(zhuǎn)染的目的，即分析轉(zhuǎn)染基因的功能和表達(dá)，需要轉(zhuǎn)染的基因穩(wěn)定整合進(jìn)入宿主染色體。

根據(jù)細(xì)胞類型，細(xì)胞群體中，最高有80%的細(xì)胞，以瞬時(shí)表達(dá)的方式表達(dá)轉(zhuǎn)染的基因。但對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，好的情況，也只有1/1000的成功率——細(xì)胞能穩(wěn)定表達(dá)轉(zhuǎn)染的基因。

所以，我們需要通過篩選活的新表型（標(biāo)記）的細(xì)胞，來分離穩(wěn)定轉(zhuǎn)染體。方法是將標(biāo)記的基因和待轉(zhuǎn)染的基因進(jìn)行重組、連接，共同轉(zhuǎn)染到細(xì)胞核內(nèi)。這種物理上沒有關(guān)聯(lián)的基因整合成1個(gè)序列，并在同一轉(zhuǎn)化細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的這種現(xiàn)象，叫做共轉(zhuǎn)化。

那么，篩選具體是如何進(jìn)行的呢？

一般情況下，這個(gè)標(biāo)記是某種編碼抗生素抗性的基因，和待轉(zhuǎn)染基因一起在細(xì)胞上表達(dá)，如第一個(gè)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞上廣泛使用的篩選基因，編碼胸苷激酶（TK）的病毒基因。

待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系，是不含TK的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系，在轉(zhuǎn)染成功后，才會(huì)變成含TK的細(xì)胞系，才能在氨基嘌呤存在的培養(yǎng)基中生存。

因此，共轉(zhuǎn)化是一個(gè)篩選細(xì)胞的實(shí)用方法。

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