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難轉染細胞Thp-1高效率轉染條件分享
發(fā)布時間： 2021-11-10 點擊次數(shù)： 2468次Thp-1細胞高效率轉染條件分享
一、轉染材料準備
1. 轉染試劑用量：10ul
2. siRNA濃度：20um/L
3. 細胞密度：1*106-1*105
4. 轉染用培養(yǎng)板：6孔板
5. 轉染試劑：Advanced DNA RNA轉染試劑；貨號：AD600150
6. 轉染時間：48小時
7. 細胞培養(yǎng)胎牛血清：Z7180FBS-500超低內(nèi)毒素胎牛血清
8. 細胞凍存液：L0100無血清細胞凍存液.
注意：本細胞轉染用量條件不適合lipo使用。
二、操作過程：
1.提前1天接種細胞：細胞匯合度在60-80%左右，再進行轉染。
2. 核酸復合物制備：將核酸與轉染試劑按照比例關系直接混合，用移液器吹打、混勻，室溫靜止15分鐘。
3.在細胞培養(yǎng)基中加入核酸復合物：根據(jù)參考用量在細胞中加入核酸復合物，并輕輕混勻；細胞培養(yǎng)基里面可以含有血清。
4.細胞換液：轉染24小時后對細胞進行正常換液，懸浮細胞轉染過程中不用換液。
5.分析結果：質(zhì)粒DNA轉染48-72小時后熒光檢測轉染效率，48-96小時檢測mRNA或蛋白表達。若進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選，則在轉染后24-48小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA轉染后9小時熒光檢測轉染效率，48-72小時檢測mRNA或蛋白表達。
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