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高效轉(zhuǎn)染質(zhì)粒大小10646bp、HGF-1牙齦成纖維細胞的操作方法
發(fā)布時間： 2021-11-11 點擊次數(shù)： 2347次
轉(zhuǎn)染條件
細胞密度：60左右
質(zhì)粒DNA濃度：648ng/ul
質(zhì)粒DNA大?。?0646bp
培養(yǎng)板：6孔板
轉(zhuǎn)染試劑用量：8ul
質(zhì)粒DNA用量：電訊
轉(zhuǎn)染試劑：AD600150，Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑
轉(zhuǎn)染時間：48小時
操作方法
提前 1 天接種細胞：細胞匯合度在 60-80%左右，再進行轉(zhuǎn)染。
核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻，室溫靜 止 10-15 分鐘。
在細胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物：根據(jù)參考用量在細胞中加入核酸復(fù)合物，并輕輕混勻；細胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。
細胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時后對細胞進行正常換液，懸浮細胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。
分析結(jié)果：質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。若 進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。
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