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RAW264.7細(xì)胞太容易分化，到底怎樣才能養(yǎng)好它？

發(fā)布時間： 2021-12-02　　點擊次數(shù)： 4904次

養(yǎng)好RAW 264.7之基礎(chǔ)篇

養(yǎng)好RAW 264.7的第一步，是要對它的基礎(chǔ)培養(yǎng)條件了如指掌，比如生長特性、細(xì)胞形態(tài)、所需的培養(yǎng)基，甚至培養(yǎng)環(huán)境、傳代比例等等，做到知己知彼，才能百戰(zhàn)百勝。

細(xì)胞名稱	RAW 264.7 (小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞)
細(xì)胞別稱	RAW264; RAW2647; RAW 264.7; RAW-264.7; Raw 264.7; RAW 264.7
種屬	小鼠（雄性，成年BALB/c鼠）
組織來源	Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤
生長特性	貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)	不規(guī)則形（圓形、短梭形）
生長培養(yǎng)基	DMEM＋10% FBS＋1% P/S
培養(yǎng)環(huán)境	氣相：95%空氣；5%CO2 溫度：37℃
推薦傳代比例	1:3 - 1:6
凍存液配方	55% DMEM+40% FBS+5% DMSO

▲RAW 264.7生長圖片

養(yǎng)好RAW 264.7之進(jìn)階篇1

除了基礎(chǔ)條件，其他外界因素也容易引起細(xì)胞的“小脾氣"，比如運輸路上的顛簸、傳代方法等等。針對幾種常見的問題，小普來一一為大家解答。

問題1 ：收貨后，細(xì)胞不見了

小普總是會收到這類反饋：收到細(xì)胞，期待值滿滿地打開包裝，但在顯微鏡下卻找不到細(xì)胞！

這是因為RAW 264.7 細(xì)胞貼壁較松，快遞運輸路上受到顛簸，可能會脫落。脫落的細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)基中不容易聚焦。

這時候不用擔(dān)心，把細(xì)胞放進(jìn)培養(yǎng)箱靜置兩個小時就可以看到了。

如果靜置后看到的細(xì)胞仍偏少，請將瓶子里的培養(yǎng)基都轉(zhuǎn)移到離心管里，1200rpm（約250g）離心3分鐘，即可看到沉淀的細(xì)胞。

細(xì)胞全部脫落，慌亂之下可能會一個細(xì)胞都找不著。這個時候離心驗證是較為合適的方法。

問題2 ：收貨處理后，細(xì)胞不貼壁

將細(xì)胞離心收集，用新鮮的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞放到新的培養(yǎng)瓶里之后，可能會出現(xiàn)細(xì)胞成團(tuán)漂浮、不貼壁的情況。

這種情況下，把細(xì)胞離心收集，用1mL培養(yǎng)基重懸，慢慢地，輕輕地吹打，直到細(xì)胞被吹成單細(xì)胞，就可以重新鋪板了。

RAW 264.7脫落后傾向于抱團(tuán)，抱團(tuán)時細(xì)胞是活著的，但很難貼壁。記得一定要把聚成團(tuán)的細(xì)胞吹散成單細(xì)胞，不然細(xì)胞很難重新貼壁。

養(yǎng)好RAW 264.7之進(jìn)階篇2

正確的傳代方法是養(yǎng)好RAW 264.7的關(guān)鍵，每一步操作都要細(xì)致入微，稍有不慎細(xì)胞就分化了。

RAW 264.7不能用胰酶消化，許多實驗室用細(xì)胞刮傳代，這是一種非常經(jīng)典好用的方法。

小普在養(yǎng)RAW 264.7細(xì)胞這十幾年里，摸索出一個更不錯的方法：吹打傳代。

吹打傳代操作簡單，對養(yǎng)細(xì)胞的萌新們更友好，也能更好地控制細(xì)胞分化率。

吹打傳代步驟

輕拍幾下培養(yǎng)皿

用1ml 的槍或者巴氏管把細(xì)胞吹下來（吹不下來的舍棄）

細(xì)胞吹下來后轉(zhuǎn)移到15ml離心管

1200rpm(約250g) 離心3min

去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞

按比例接種到新的培養(yǎng)皿中

吹打傳代時機(jī)

吹打傳代時機(jī)

當(dāng)細(xì)胞密度較低的時候，可能不太好吹下來。

當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%的時候，最容易吹下。

▲推薦傳代的密度

養(yǎng)好RAW 264.7之終結(jié)篇

講了那么多如何處理RAW 264.7分化的情況，那分化了的細(xì)胞到底是什么形態(tài)呢？

分化的RA264.7

分化的細(xì)胞呈多角形，體積明顯增大，時常有較長的黑色觸角。

注意事項

RAW 264.7細(xì)胞三天不傳代更容易分化，很難吹下，每一次接種密度都要控制好；

分化的細(xì)胞貼壁牢固，傳代的時候請勿強(qiáng)制性吹下這些細(xì)胞，只接種容易吹下的那些未分化細(xì)胞；

吹打的力度一定要輕，切勿暴力吹打；

細(xì)胞的貼壁性和培養(yǎng)器皿的材料也有關(guān)，有時RAW 264.7 會出現(xiàn)太容易吹下的情況，連分化細(xì)胞都貼壁較松，此時更適宜用巴氏管吹打；

培養(yǎng)時，無法保證100% 不分化，通過傳代可以將分化比例控制在一定范圍；

RAW 264.7分裂活躍，記得每天看一看，周末也要抽點時間關(guān)心一下它哦~

養(yǎng)細(xì)胞不易，每個細(xì)胞對我們而言，都像是寶寶，含在嘴里怕化了，捧在手里怕摔了。

正是因為對科研的無畏堅持，讓我們更有力量接受考驗，因為科研本身，值得敬畏和付出。

RAW 264.7的起源

加利福尼亞索爾克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV（Abelson鼠科白血病病毒）誘發(fā)腫瘤的腹水中建立了RAW 264細(xì)胞系。

他發(fā)現(xiàn)RAW 264可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖，并且能通過抗體依賴途徑分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。

RAW 264.7不分泌A-MuLV（但用Moloney MuLV 拯救后可以在上清檢測到病毒），對LPS非常敏感。該研究1978年發(fā)表在《CELL》雜志。

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