最新国产の精品合集bt7086,欧美性xxxx极品,欧美情侣性视频

技術文章ARTICLE

您當前的位置：首頁 > 技術文章 > T、B淋巴細胞分離

T、B淋巴細胞分離

發(fā)布時間： 2022-03-11　　點擊次數(shù)： 1876次

原理
淋巴細胞與用溴花二氨基異硫氫化物（簡稱AET）處理的綿羊紅細胞（SRBC）混合后，其中全部T淋巴細胞均能吸附AET-SRBC，形成牢固穩(wěn)定而巨大的E-花環(huán)，較正常未處理的SRBC形成的E-花環(huán)百分比為高，而且形成快速，不易脫落，重復性好。再經淋巴細胞分層液分離時，AET-E花環(huán)易沉于管底，而未形成E-花環(huán)的T淋巴細胞，用低滲液解花環(huán)周圍的 AET-SRBC，便可獲得純T淋巴細胞，而B淋巴細胞可直接取自分層液的界面。
材料與儀器
新鮮豚鼠血
Hanks液小牛血清 199培養(yǎng)液生理鹽水氯化鈉溶液
離心管離心機
步驟
1. AET-RRBC制備

（1）AET溶液的制備
稱取AET粉劑402毫克，溶于10毫升蒸餾水中，使成為0.143 M 溶液，用4N NaOH溶液調pH9.0。該溶液必須新鮮配制，不宜久存。

（2） AET處理RRBC
取洗滌好壓積的RRBC，按一份壓積AET—RRBC加入4份新鮮配制的pH9.0的AET溶液充分混勻置37℃水浴15分鐘，每隔5分鐘搖勻一次。取出加冷無菌生理鹽水至離心管口（1~2厘米）1800轉/分離心5分鐘。連續(xù)洗滌3-5次，每洗一次，必須充分搖勻，以減少AET-RRBC粘附成團，并觀察有無溶血。若有溶血現(xiàn)象，則用含小牛血清的199培養(yǎng)基再洗一次，最后配成10%AET-RRBC懸液，置4℃保存，不得超過5天。

（3）1%AET-RRBC的配制：
將預先配制并保存于4℃冰箱的10%濃度的AET-RRBC，以含10%小牛血清的199培養(yǎng)液稀釋至1%。

2. 從新鮮豚鼠血液分離單個核細胞，操作見后試驗。

3. AET—E花環(huán)試驗：
將分離的單個核細胞（2x106/毫升）與等量1%AET-RRBC混合，置37℃水浴15分鐘，每隔5分鐘搖勻一次，分裝數(shù)管，每管2—3毫升，低速離心（1000轉/分鐘）5分鐘后，移至4℃冰箱45分鐘。

4. T淋巴細胞和B淋巴細胞的分離
將形成E-花環(huán)的細胞懸液，再用淋巴細胞分層液分離，吸取界面云霧狀的細胞，即為富含B淋巴細胞群。沉淀于管底的E-花環(huán)，用Hanks液洗一次后，加雙蒸水3毫升處理3分鐘，低滲裂解E-花環(huán)周圍的RRBC，立即加3.5%氯化鈉溶液1毫升，使還原為等滲，低速離心沉淀，即得富含T淋巴細胞群。

注意事項

1. 分離B細胞過程較長，為了避免B細胞自然死亡，在最后沖洗B細胞時可以用1640,而且要加入5一10%的小牛血清。

2. 每次洗滌時，不要將試管底部液體吸干，即防止壓積的B細胞接觸空氣。

3. 使用抗B淋巴細胞血清與受檢細胞按NIH方法進行微量B細胞毒試驗，使用倒置相差顯微鏡讀數(shù)。

常見問題

關于從小鼠脾臟中分離：

1.脾臟組織所含結締組織比較少，可以直接在篩網上研磨，無需剪碎，也不用顧慮血管。

2.ficoll中含多聚糖，所以許多人喜歡把它放4度存放，是否室溫對實驗影響不大脾臟分離淋巴細胞實驗比較簡單，所以用普通的淋巴細胞分離液就行。

3 .離心2000rpm×20min，這步很關鍵，還有就是加細胞懸液時一定要貼壁緩慢加入，不要破壞分界面，分離液與細胞懸液我常用1：2，還有就是所選用的離心管粗細也會影響分層。

4.中間的懸浮白色環(huán)狀細胞層即是所要的淋巴細胞層。

5.洗細胞主要是洗去分離液，所以不能省去。

以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規(guī)模生物生產、基因和細胞治療領域客戶，提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產，包括培養(yǎng)間充質干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產服務；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質膠產品；提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領域提供優(yōu)質的產品和技術服務，努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)。

下一篇：斑點濾膜結合法

上一篇：Real-time PCR實驗攻略（基本方法二）

產品中心 Products

lishankj.com-美国式禁忌2,黑人刚破完处就三p,少妇被爽到高潮喷水,性猛交╳xxx乱大交

T、B淋巴細胞分離

原理

材料與儀器

步驟

注意事項

常見問題