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分離雞胚背根神經節
發布時間： 2022-12-02 點擊次數： 1528次材料與儀器
酶溶液 DRG
離心管 培養皿 解剖顯微鏡步驟
解剖前在 15 ml 離心管中配制酶溶液，置 37℃ 水浴特用。
2. 解剖胚胎，解剖全過程保持組織濕潤。
(1) 殺死胚胎，去腿，放于 100 mm 培養皿。
(2) 用鈍頭剪刀沿腹中線作一切口，將皮膚向兩側卷縮至能取出內臟。
(3) CMF-PBS 漂洗體腔。
(4) 用細鑷子或用 CMF-PBS 吹打，小心去掉脊柱上的任何黏附組織。
3. 在解剖顯微鏡下，用細鑷子從脊髓上細心撕下脊膜。取出交感神經節，即 DRG 上脊髓兩側的細條帶。
4. 用微簧剪刀從神經干上剪下神經節，用細鑷子從脊髓上摘下 DRG，放于盛有 1 ml CMF-PBS 的 35 mm 培養皿。
5. 分離適量 DRG，確保無任何黏附組織或神經干，時間以不超過 45 分鐘為宜。
6. 在預熱的酶溶液中加 1 ml 含 DRG 的 CMF-PBS。37℃ 水浴孵育 8 或 13 分鐘，每隔 3 分鐘顛倒一次管子。
7. 加入 1 ml FBS 終止酶反應，沉淀 DRG。CMF-PBS 清洗 DRG，再沉淀。
8. DRG 懸于 1 ml 補給了 NGF 的完培（37℃）。用尖-端內徑燒至一半的巴斯德吸管輕輕吹散細胞（6 次）。如果仍有組織塊殘留，使其沉降，細胞懸液轉移至另一支 15 ml 無菌離心管。重復吹散殘留組織塊，兩次樣品混合。
9. 計數分散細胞，根據需要以合適密度接種。
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