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植物原生質體的制備

發(fā)布時間： 2023-01-29　　點擊次數： 2128次

原理
去掉植物細胞壁的方法可以是機械的人工操作，也可以利用酶解法。較早利用機械法制備原生質體的首-推Klercker（1892），直到1960 年英國科學家Cocking 才第一次用酶法大量制備原生質體。本實驗以植物的葉肉組織為材料，利用纖維素酶和果膠酶來消化細胞壁，分離細胞。
材料與儀器
油菜或菠菜或煙草
氯化鈣蒸餾水 2蔗糖酶解液
顯微鏡離心機離心管剪刀鑷子吸管培養(yǎng)皿載玻片蓋玻片
步驟
1、取材根據實驗目的和條件選取不同的材料

2、分離原生質體

（1）撕葉下表皮

（2）酶解將撕去下表皮的葉片剪成小塊，放在盛有5mL 酶液的小培養(yǎng)皿中，讓去除下表皮的一面接觸酶液，輔滿一層，在25——28℃下酶解60——90 分鐘

3、收集純化

（1）用吸管將酶解液吸至5mL 離心管中，以600rpm 離心5 分鐘以上，使原生質體沉降

（2）將上清（酶解液）回收，剩下原生質體及殘渣于管底

（3）加氯化鈣液約2mL，輕輕吹打均勻

（4）用注射器向離心管底部緩緩注入蔗糖約2—3mL，出現下部蔗糖液，上部原生質體懸浮液

（5）以600rpm 離心10 分鐘，在兩液相之間出現一條綠色帶，便是純凈的原生質體

4、觀察或培養(yǎng)

取少許原生質體于載片上，蓋片觀察其形態(tài)，或者將原生質體接種在培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，再生植株。
注意事項
要培養(yǎng)懸浮細胞系需較長時間。因此,應著重改善培養(yǎng)條件,主要包括選用合適的培養(yǎng)基包括培養(yǎng)基種類、添加物、激素種類及水平等及培養(yǎng)方式根據培養(yǎng)物狀態(tài)適時改換適宜培養(yǎng)基選擇合適的外植體及誘導時期。
常見問題
原生質體是裸露的、具有生命活性的細胞,體內包裹著細胞核、細胞器、細胞質等, 因此原生質體具有再生細胞壁、進行連續(xù)分裂并生成完整植株的能力 , 即具有細胞全*性。原生質體能攝人如 DNA、質粒、病毒、細菌、細胞器等外源物質 , 是植物細胞工程進行遺傳操作、基因轉移的良好材料。

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