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PCR凝膠電泳問(wèn)題，全都總結(jié)出來(lái)了！

發(fā)布時(shí)間： 2024-05-31　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1683次

1.Marker相關(guān)問(wèn)題
1.1Marker 不直，偏斜或拖尾
原因：
1.膠配制的問(wèn)題，制作不均勻或有污染或瓊脂糖質(zhì)量不好；
2.電泳緩沖液過(guò)于老舊，考慮更換；
3.電壓太高，凝膠受熱導(dǎo)致不均勻；
4.電泳槽的電極歪斜；

1.2Maker 跑不開(kāi)
原因：
1.膠濃度太大；
2.電泳時(shí)間太短；

2.PCR產(chǎn)物相關(guān)問(wèn)題
2.1沒(méi)條帶
原因：
沒(méi)跑出來(lái)

2.2條帶微弱
原因：
1.DNA降解
2.上樣量過(guò)少
3.沒(méi)跑出來(lái)，產(chǎn)物濃度過(guò)低，需再次PCR

2.3非特異性擴(kuò)增
原因：
1.引物設(shè)計(jì)不合理。需重新設(shè)計(jì)引物，balst檢測(cè)引物特異性；
2.試劑被污染。包括水，酶，引物等。重新更換；
3.退火溫度太高。提高退火溫度，增加退火時(shí)間，減少循環(huán)數(shù)；
4.酶加入過(guò)多；

2.4 PCR產(chǎn)物彌散，拖尾或偏斜，Maker正常
原因：
1. 引物保存不當(dāng)，降解。重新配制引物工作液。
2.模板降解或過(guò)量。重新檢查模板質(zhì)量，減少模板用量。
3.非特異性擴(kuò)增。提高退火溫度，增加退火時(shí)間，減少循環(huán)數(shù)。
4.酶量過(guò)多或酶的質(zhì)量差。
5. 有蛋白和鹽的污染。

2.5 PCR產(chǎn)物和Maker 都彌散或拖尾
原因：
1.膠配制的問(wèn)題，制作不均勻或有污染或瓊脂糖質(zhì)量不好；
2.電泳緩沖液過(guò)于老舊，考慮更換。
3.電壓太高，凝膠受熱導(dǎo)致不均勻。

2.6 PCR產(chǎn)物與目的大小不符合
原因：
1.引物特異性不好。需重新設(shè)計(jì)引物，balst檢測(cè)引物特異性。
2.存在新的異構(gòu)體。
3.是目的基因，但大小有差異（我遇到過(guò)）。膠回收過(guò)后再次電泳條帶變?yōu)檎４笮　Ｓ龅竭@個(gè)情況可以測(cè)序看看結(jié)果。

2.7 電泳孔亮
原因：有蛋白或者多糖的污染，這些大分子物質(zhì)影響了DNA或RNA的出孔，使其停留在孔中或者出孔很慢。導(dǎo)致孔以及接近孔的位置很亮。
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