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細(xì)胞培養(yǎng)新手答疑帖（內(nèi)含污染、傳代、復(fù)蘇的問(wèn)題&解析）

發(fā)布時(shí)間： 2025-04-27　　點(diǎn)擊次數(shù)： 706次

1.污染
Q：以下圖片中的細(xì)胞是否已污染？這些小黑點(diǎn)，PBS沖洗能去掉大部分，但第二天會(huì)重新出現(xiàn)。
A：圖中的細(xì)胞存在微生物污染，在細(xì)胞與細(xì)胞間隙之間，有大量的小黑點(diǎn)聚集，且形狀基本上都是規(guī)則的顆粒狀。

當(dāng)使用PBS沖洗時(shí)，能洗掉大部分，但卻無(wú)法全部清楚，因?yàn)橹灰獨(dú)埩魳O少量的微生物，還是會(huì)繼續(xù)繁殖的。

從問(wèn)題描述來(lái)看，PBS沖洗后第二天黑點(diǎn)就重新出現(xiàn)，憑這一點(diǎn)就可以輔助我們進(jìn)行判斷——這是微生物污染。如果PBS沖洗后，黑點(diǎn)不再出現(xiàn)，那么黑點(diǎn)可能只是培養(yǎng)物碎片/雜質(zhì)，但如果會(huì)不斷增加、無(wú)法全部清除，就肯定是污染。

有同學(xué)可能會(huì)疑惑，我不是在培養(yǎng)基中加了雙抗么，為什么還會(huì)污染呢？

雙抗，能抑制微生物增殖，但無(wú)法全部殺滅微生物。當(dāng)污染達(dá)到一定程度后，雙抗也就無(wú)法繼續(xù)抑制它們的增殖，而隨后，你就能在顯微鏡下看到微生物污染了。此時(shí)，雙抗對(duì)微生物的影響已經(jīng)失效。

對(duì)于上圖的細(xì)胞，我們只能扔棄，避免其波及其他培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的細(xì)胞。

相應(yīng)的，這里也貼出一張正常狀態(tài)、沒(méi)有微生物污染的細(xì)胞，在視野內(nèi)細(xì)胞與細(xì)胞的間隙是很干凈的，沒(méi)有黑點(diǎn)、桿狀、絲狀物，細(xì)胞也基本上是完好無(wú)損的，沒(méi)有解體的細(xì)胞。

2.傳代
Q：以下圖中的細(xì)胞狀態(tài)正常嗎？繼續(xù)培養(yǎng)還是消化傳代？

A：圖中的細(xì)胞密度已經(jīng)達(dá)到了100%，細(xì)胞與細(xì)胞之間已經(jīng)沒(méi)有任何空隙，所以我們看到這些細(xì)胞都擠成一堆了，它原本是什么形態(tài)的根本無(wú)法觀察出來(lái)。
當(dāng)細(xì)胞的密度達(dá)到100%時(shí)，細(xì)胞就會(huì)與周圍的細(xì)胞全部貼合在一起，產(chǎn)生“接觸抑制"，表現(xiàn)為停止增殖，隨后就是細(xì)胞狀態(tài)開(kāi)始下滑——進(jìn)入衰退。
如果拿這個(gè)狀態(tài)的細(xì)胞去做實(shí)驗(yàn)，效果會(huì)受到影響。大家要盡量避免細(xì)胞長(zhǎng)得太密才進(jìn)行消化傳代。以下是我們之前提供過(guò)的一張細(xì)胞密度示意圖。一般來(lái)說(shuō)，80%-90%的密度就可以消化了。
3.復(fù)蘇
Q：以下圖中的細(xì)胞是復(fù)蘇后第二天的，細(xì)胞（貼壁生長(zhǎng)的）還活著嗎？

A：復(fù)蘇后的細(xì)胞，如果是貼壁生長(zhǎng)的，一般種入培養(yǎng)器皿后大約10-16小時(shí)就可以貼壁生長(zhǎng)了。

圖中的細(xì)胞并沒(méi)有貼壁的形態(tài)，仍然是圓形的，可以判斷出復(fù)蘇操作失敗了，視野內(nèi)的細(xì)胞應(yīng)該都是沒(méi)有存活下來(lái)的。

我們進(jìn)一步了解當(dāng)時(shí)的操作細(xì)節(jié)，發(fā)現(xiàn)復(fù)蘇時(shí)有兩個(gè)重要細(xì)節(jié)：1 凍存區(qū)和水浴鍋相隔很遠(yuǎn)，走路要2分鐘；2 放入水浴鍋后，大約還經(jīng)過(guò)了2分鐘才完成解凍。
細(xì)胞復(fù)蘇要遵循“快融"這一個(gè)原則，因?yàn)榧?xì)胞從低溫到室溫的升溫過(guò)程中，細(xì)胞內(nèi)會(huì)重新形成冰晶，冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷很大，如果不能盡快讓細(xì)胞跨過(guò)這個(gè)階段，則細(xì)胞復(fù)蘇后的狀態(tài)會(huì)較差。

我針對(duì)上面提到的操作細(xì)節(jié)，給出的建議是：從凍存區(qū)拿出細(xì)胞后，應(yīng)該用最快的速度沖去水浴鍋進(jìn)行解凍。

解凍的過(guò)程也要盡快完成，可以嘗試拿一個(gè)塑料薄膜手套裝著凍存管，然后鑷子夾住管子和薄膜手套部分，深入水中不斷搖晃，觀察到管內(nèi)已經(jīng)全是液體后，立即停止并盡快進(jìn)入下一步操作。

以上就是本期答疑帖的全部?jī)?nèi)容，如果需要PBS、雙抗溶液可以向我們咨詢，歡迎關(guān)注安培生物科技有限公司了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

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