-
為什么不能用質粒DNA抽提試劑來提取基因組DNA？
發布時間： 2021-08-24 點擊次數： 3934次導讀
為什么同樣抽提質粒DNA的試劑不能用來抽提基因組DNA呢？差別很大么？要買兩種試劑盒真是麻煩啊！你還不要不相信，有小伙伴試過，還真沒抽提出來。今天小編就來和大家一起探究下原因！
基因組DNA的抽提，一般不會用到質粒抽提的試劑盒，究其原因是由于兩者的原理*不同。兩者不都是DNA抽提么？其實關鍵在于這兩者在實驗的初始設計上就*不同。先給大家解釋一下質粒抽提吧。
質粒抽提
質粒抽提通常用的是堿裂解法，一般的試劑盒都會有 SolutionⅠ，SolutionⅡ，SolutionⅢ，有的還會有 SolutionⅣ，然后是過柱子。
SolutionⅠ
SolutionⅠ一般都是用來重懸菌液的，會加入RNaseⅠ，降解掉里面大腸桿菌的RNA。同時里面還會用Tris-HEI體系來維持一個pH，另外會加入較大量的EDTA，去螯合掉里面二價金屬離子，使菌體本身的DNase失活。其實用雙蒸水來代替SolutionⅠ問題也不大，關鍵就是把菌重懸起來就行。
Solution Ⅱ
Solution Ⅱ，一般來說主要成分有兩個，就是NaOH和SDS，NaOH主要是用于破壞細胞膜結構，強堿條件下，菌體的細胞壁結構、細胞的磷脂雙分子層和微囊結構的構相都會發生變化。而SDS在這里主要并不是起到裂解蛋白的作用，而是結合氨基酸，一般兩個氨基酸可以結合一個SDS分子。菌體裂解后，其實小片段的質粒已經釋放出來了，而大片段的基因組DNA還結合在蛋白質上。
Solution Ⅲ
Solution Ⅲ的主要成分是醋酸鉀/醋酸緩沖液。首先長時間強堿環境下，DNA會斷裂，所以需要用醋酸進行中和，而鉀離子可以與SDS產生沉淀反應，使可溶于水的十二烷基磺酸鈉變成不溶于水的十二烷基磺酸鉀。這樣結合蛋白質的PDS就被沉淀下來了，同樣基因組DNA也同樣被沉淀了下來，用硅膠吸附釋放在上清里的質粒，或者用無水乙醇對上清進行沉淀，即可獲得質粒的DNA。
基因組DNA抽提
而普通的基因組 DNA 抽提，首先是裂解，用離子型的蛋白變性劑：CTAB 或者 SDS 對細胞進行裂解（加不加蛋白酶 K 其實并不太要緊），破膜的同時使得 DNA 從蛋白上解離下來。 加入高鹽溶液使蛋白質沉淀。然后用酚仿，使蛋白質沉淀變性在水相油相間，并分離出的可溶性蛋白。上清用異丙醇將 DNA 沉淀下來，同時低溫加入一定量的一價陽離子，可加速 DNA 沉淀。這些能和上述的質粒抽提混為一談么？！當然不行啊！
小伙伴們現在能明白為啥基因組 DNA 不能用質粒抽提的試劑了吧……
銷售熱線
