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大鼠平滑肌細(xì)胞的貼壁培養(yǎng)方法

發(fā)布時(shí)間： 2022-10-24　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1559次

貼壁法：
器械
顯微器械：眼科剪一把，直彎眼科鑷各一把，細(xì)結(jié)鑷一把，手術(shù)刀一把，針頭諾干
殺老鼠器械：手術(shù)剪一把，大鑷子一把，彎眼科鑷一把，組織鉗一把，50ml燒杯一個(gè)（錫紙包好）
另外：10ml離心管兩個(gè)，培養(yǎng)皿兩個(gè)，10ml的瓶子三個(gè)，小濾器兩個(gè)，硅膠板一塊，培養(yǎng)瓶蓋子諾干
貳。試劑
D-HANKS液250ml，雙抗2ml（青霉素16萬U/ml鏈霉素15萬U/ml）。FBS和含20％FBS的DMEM
叁。步驟
1．取大鼠，稱重，水合氯醛0。3ml/100g腹腔麻醉
2．綁好大鼠，先剪開腹腔，剪斷腹部大動(dòng)脈放血，后剪開胸腔，取肺
3．放入燒杯，后移入超凈臺(tái)，置于冰盒上。以后的操作皆在冰盒上操作
4．倒入已加雙抗的D-HANKS，清洗肺部，扯掉食管，剪掉心臟
5．用針頭將肺固定在硅膠板上，硅膠板置于培養(yǎng)皿里
6．用鑷子將肺的內(nèi)外膜除去，只剩下平滑肌
7．用眼科剪將肺部剪成1－2mm的小碎塊
8。在培養(yǎng)瓶中加入一到兩滴的FBS，輕搖培養(yǎng)瓶，使血清鋪滿瓶底。
9。用眼科剪將碎塊放進(jìn)瓶中，后用滴管將碎塊在瓶里鋪均勻。
10。將瓶底朝上，放入培養(yǎng)箱中
11。四個(gè)小時(shí)后，將瓶子翻回
這樣處理后，一般五天內(nèi)不用看它，第六天開始，可以加入含20％FBS的DMEM

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