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PCR 產物純化
發布時間： 2023-04-21 點擊次數： 1698次材料與儀器
TE 或去離子水 PCR 產物
離心機和轉子 PCR 濾 件 微量離心管步驟
一、材料
1. 緩沖液和溶液
TE(lOmmol/L Tris-HCl，lmmol/L EDTA，pH7.5) 或去離子水
2. 核酸和寡核苷酸
待測序的 PCR 產物
3. 離心機和轉子
帶有固定傾角轉子的小型離心機，如 Eppemlorf5415C
4. 特殊設備
AmiconMicrocon-PCR 濾件（Millipore) 或者相當的產品，微董離心管或接收管
二、方法
1. 對每一個待純化的 PCR 產物，都在接收管中放置一個濾件，濾件的儲液面向上
儲液池中加入 400ul 去離子水或 TE，注意加樣時不要觸及膜。加入 100ulPCR 產物，避免帶進礦物油。如果 PCR 產物不足 100ul, 用去離子水或 TE 補足，蓋上蓋子。
2. 將 1 中所得組合體用帶有固定傾角轉子的離心機，l000 g 離心 15 min(例如，Eppendorf5415C 離心機上 3300r/min)。注意蓋子和管的結合部朝向轉子的中央。
3. 移去濾件，將其放入一干凈的收集管中，有膜面朝上（如果愿意，濾件可以一直
存到樣品分析結束）。在濾件上小心地加 20ul 去離子水或 TE，注意不要觸及膜，然后將濾件反轉過來，放回到干凈的收集管中，使帶有液體的一面朝下。4.1000 g 離心 2 min, 收集純化的片段。
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