东北五仙电影,国产人成视频在线视频,成全免费高清观看在线电视剧大全

技術(shù)文章ARTICLE

您當前的位置：首頁 > 技術(shù)文章 > 消滅 PCR 非特異性擴增的方法

消滅 PCR 非特異性擴增的方法

發(fā)布時間： 2023-06-28　　點擊次數(shù)： 2362次

非特異性擴增，即進行 PCR 所擴增出來的條帶不是所要的，引物與模板在非目的條帶處有錯配，導(dǎo)致延伸產(chǎn)物不是目的條帶。例如引物二聚體，即引物在退火過程中產(chǎn)生了 hairpin 結(jié)構(gòu)或其他二級結(jié)構(gòu)，或者引物在模板的某些位置非特異性地結(jié)合，也同樣會產(chǎn)生非特異性擴增。PCR 產(chǎn)物都是通過引物延伸產(chǎn)生的。當引物產(chǎn)生了二聚體或者非特異性擴增產(chǎn)物之后，引物本身就無法再延伸形成 PCR 產(chǎn)物了，這樣的情況下，非特異性擴增產(chǎn)物越是多，那目的產(chǎn)物就越是少。如果在 qPCR 過程中，就會在熔解曲線中形成雙峰。

消滅 PCR 非特異性擴增的方法：
１、引物設(shè)計的過程中要用 Primer premier 5.0 來驗證一下二聚體；

2、引物合成后，先做一次梯度 PCR，檢測最合適的退火溫度，一般高退火溫度可以提高引物對模板的特異性從而降低引物二聚體；

3、降低 Mg2+濃度，鎂離子濃度高，會導(dǎo)致大量的非特異性擴增，但是沒有鎂離子的話，也會導(dǎo)致 Taq 酶的失活；

4、降低 dNTP 濃度，dNTP 也是非特異性擴增的一個罪魁禍首，降低它的濃度，也能有效降低二聚體及其他非特異性擴增；

5、降低引物濃度，一般的 PCR 引物都是過量的，降低了引物濃度自然也能降低引物之間形成二級結(jié)構(gòu)的可能性；

6、提高退火溫度，這個道理很簡單，引物的退火溫度提高，引物間的二級結(jié)構(gòu)形成可能性就會降低；

7、延長退火時間，這個也可以減弱引物間結(jié)合的可能性；

8、DMSO 及甜菜堿，這些 PCR 促進劑，主要是用于 CG 含量高的模板上，降低 DNA 的二級結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生，但根據(jù)經(jīng)驗，加入 DMSO 之后需要同時提高一點退火溫度來補平（qPCR 不太適用）；

9、熱啟動法，通過 95℃的高溫?zé)釂樱邷亟怄湥沟靡镩g的二級結(jié)構(gòu)破壞，以此降低二聚體產(chǎn)生。

深圳安培生物科技有限公司，是一家具有核心的技術(shù)實力、壹流的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設(shè)在廣東，服務(wù)面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供世界前沿水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。

下一篇：RT-PCR的無擴增產(chǎn)物

上一篇：DNA 復(fù)制需要哪些元素

產(chǎn)品中心 Products

lishankj.com-美国式禁忌2,黑人刚破完处就三p,少妇被爽到高潮喷水,性猛交╳xxx乱大交

消滅 PCR 非特異性擴增的方法