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吐溫20在WB中的作用是什么？

發(fā)布時間： 2024-03-20　　點(diǎn)擊次數(shù)： 4623次

Western blot 實(shí)驗(yàn)中常用的洗液 TBST 是一種實(shí)驗(yàn)室配制液體，其配方大體相似，其中一種組成成分是 Tween-20，它是一種黃色或琥珀色的透明油狀液體，有特殊的氣味和輕微的苦味。使用移液器吸取時會感覺到一種滯后感。

Tween-20 ，也稱Polyethylene glycol sorbitan monolaurate，中文名為吐溫-20或吐溫20。為非離子型表面活性劑，大白話就是：它的作用就是洗掉非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)。其在 Western blot 實(shí)驗(yàn)里的作用原理如下：它可以通過降低溶液表面張力，使抗體更容易擴(kuò)散并結(jié)合到膜上的目標(biāo)蛋白，同時減少非特異性結(jié)合，從而提高檢測的特異性和信噪比。

在WB洗液里的吐溫是和BSA一樣，對抗原抗體蛋白提供保護(hù)作用，同時因?yàn)槭潜砻婊钚詣ㄋ颈P加成親水的環(huán)氧乙烷基團(tuán)后的化合物），可以減少抗體對抗原的非特異性作用，用于洗脫未結(jié)合的抗體、減少非特異性結(jié)合。
如果抗體濃度過高或封閉不充分導(dǎo)致背景過高，可以通過降低抗體稀釋度、增加洗膜次數(shù)和Buffer用量，或在Wash Buffer中添加終濃度0.05%的Tween-20來改善。
雖然 WB 是一類基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，但是基礎(chǔ)并不代表簡單。翻車的主要原因在于 WB 的步驟實(shí)在繁瑣：從配置蛋白膠開始，到蛋白電泳、蛋白轉(zhuǎn)膜、抗體孵育，一整套流程下來花費(fèi) 1～2 天的時間才能進(jìn)行最后的顯影。這些環(huán)節(jié)中但凡有一個出錯，就會導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的失敗。
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