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染料排斥法測定細胞生存力實驗

發(fā)布時間： 2022-12-13　　點擊次數(shù)： 2078次

原理
萘黑、臺盼藍以及很多其他染料[KahenbachetaL1958]均不能透過活細胞。

將細胞懸液與染料混勻，在低倍顯微鏡下檢査。
材料與儀器
胰蛋白酶
巴斯德吸管顯微鏡手執(zhí)計數(shù)器生存力染料血細胞計數(shù)板
步驟
材料

無菌

受試細胞，如胰蛋白酶消化的貼壁細胞、融化冷凍的細胞或原代離散的細胞
合適的生長液 20ml
0.25% 胰蛋白酶 5ml
D-PBSA10ml

非滅菌

血細胞計數(shù)板
生存力染料 1ml (如用D-PBSA 或HBSS 配制的 0.4% 臺盼藍或 1% 萘黑）
巴斯德吸管
顯微鏡
手執(zhí)計數(shù)器

操作步驟

1. 用胰蛋白酶消化或離心與重懸，制備高濃度的細胞懸液（約1X106 個/ml)。

2. 取一塊干凈的血細胞計數(shù)板，將蓋玻片間定在適當位置上。

3 . 將一滴細胞懸液和一滴（臺盼藍）或四滴（萘黑）染料混勻。

4 . 加至血細胞計數(shù)板的計數(shù)室中。

5 . 靜置1～2min (但不要放置很久，否則活細胞會受到損傷而吸收染料）。

6 . 將計數(shù)板置于顯微鏡下，選擇10X 物鏡，利用網(wǎng)格線聚焦。
7 . 計數(shù)細胞總數(shù)以及著色細胞數(shù)。

8 .清洗血細胞計數(shù)板，放人盒內(nèi)。

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